Enraizamento in vitro de catuaba (Anemopaegma arvense (Vell. ) Stell. ex de Souza), uma planta medicinal do Cerrado / Study on the in vitro rooting of Anemopaegma arvense (Vell. ) Stell. ex de Souza, a medicinal plant of the Brazilian Cerrado

Este trabalho foi realizado com o objetivo de otimizar o protocolo para enraizamento in vitro de Anemopaegma arvense, planta medicinal do Cerrado em risco de extinção e conhecida popularmente como catuaba, a qual é amplamente utilizada na medicina popular. Brotações cultivadas in vitro foram inoculadas em meio de cultura MS/2 liquido e MS sólido suplementado com diferentes concentrações de auxinas, poliaminas ou dithiothreitol (DTT). As avaliações foram realizadas quanto à porcentagem de enraizamento, número e comprimento das raízes. A presença de NAA (Ácido naftaleno acético) no meio de cultura foi essencial para promover a indução de raízes adventícias nas brotações. A maior porcentagem de enraizamento, 50%, foi obtida no tratamento 2 mg L-1 de NAA com tempo de permanência de 15 dias nesta auxina. No experimento com poliaminas o melhor tratamento foi MS/2 + 5 mg L-1 de putrescina, com 27% de brotações enraizadas. Na presença de DTT (Dithiothreitol), 23% das brotações enraizaram em 0,10 mg L-1 de DTT. A presença da auxina NAA e a alternância no tempo de permanência foi a melhor condição para promover o enraizamento in vitro da de A. arvense. .

This work was carried out in order to optimize an efficient protocol for the in vitro rooting of Anemopaegma arvense, a medicinal plant of the Brazilian Cerrado in danger of extinction, popularly known as Catuaba in Portuguese and widely used in folk medicine. Shoots cultivated in vitro were inoculated in liquid MS/2 and solid MS culture medium supplemented with different concentrations of auxins, polyamines or dithiothreitol (DTT). Evaluations were performed for the rooting percentage and for the number and length of roots. The presence of NAA (naphthaleneacetic acid) in the culture medium was essential to promote the induction of adventitious roots. Higher rooting percentage (50%) was obtained in the treatment with 2 mg L-1 NAA and duration of stay of 15 days in this auxin. In the experiment with polyamines, the best treatment was MS/2 + 5 mg L-1 putrescine with 27% of shoots rooted. In the presence of DTT (dithiothreitol), 23% of shoots rooted at 0.10 mg L-1 DTT. The presence of the auxin NAA and the alternation in length of stay was the best condition to promote in vitro rooting of A. arvense. .

Ocorrência de fungos micorrízicos em catuaba (Anemopaegma arvense (Vell. ) Stell. ex de Souza - Bignoniaceae), uma planta medicinal do Cerrado em risco de extinção / Michorrizical funghi studies in catuaba (Anemopaegma arvense (Vell. ) Stell. ex de Souza), a medicinal plant from the Cerrado region at risk of extinction

Este trabalho foi realizado com o objetivo de verificar a ocorrência de fungos micorrízicos, identificar suas espécies, e avaliar a colonização em raízes de plantas de diferentes populações e variedades de Anemopaegma arvense, uma planta medicinal do Cerrado em risco de extinção. As avaliações da colonização micorrízica e identificação de espécies de fungos micorrízicos arbusculares (FMAs) foram realizadas no Laboratório de Microbiologia do Solo da Universidade Federal de Lavras (UFLA). Foram utilizadas raízes de 10 plantas coletadas em diferentes locais juntamente com as amostras de solo próximo ao sistema radicular de populações naturais das variedades: glabra, puberula e petiolata. Os esporos foram extraídos do solo por meio da metodologia de peneiramento úmido e, para a avaliação e observação da colonização radicular, as raízes coradas foram observadas em microscópio estereoscópico (ampliação 10 a 40x). Em todas as amostras analisadas foi possível identificar espécies de FMAs, exceto para a variedade puberula, coletada no município de Mogi Guaçu-SP. O número de esporos variou de maneira significativa entre as amostras e os locais amostrados, não havendo distribuição regular. Acaulospora scrubiculata, A. spinosa, A. longula, Escustelospora heterogama, Paraglomus occultum, Gigaspora margarita, Gigaspora sp., dentre outros, encontram-se entre as espécies identificadas. Quanto à avaliação da colonização micorrízica nas raízes, observou-se que todas as variedades foram colonizadas no sitema radicular, verificada por meio da presença de hifas. No entanto, a colonização não foi constatada em todas as amostras avaliadas e também não foi observada a formação de arbúsculos e/ou vesículas.

This work was carried out to verify the occurrence, identify species of mycorrhizal fungi and to evaluate the colonization in roots of plants of different varieties and populations of Anemopaegma arvense, a medicinal plant from the Savannah, in danger of extinction. Assessments of mycorrhizal infection and identification of species of mycorrhizal fungi (AMF) were conducted at the Laboratory of Soil Microbiology, Federal University of Lavras (UFLA). We used roots from 10 plants collected at different sites, along with samples of soil near the root system of natural populations of the varieties glabra, puberula and petiolata. Spores were extracted from soil by the wet sifting methodology and, for the assessment and observation of the root colonization, the stained roots were observed under a stereomicroscope (magnification 10 to 40x), respectively. In all samples it was possible to identify AMF species, except for the variety puberula, collected in the municipality of Mogi Guaçu - SP. The number of spores varied significantly between samples and sampling sites, with no regular distribution. Acaulospora scrubiculata, A. spinosa, A. longula, Escustelospora heterogama, Paraglomus occultum, Gigaspora margarita, Gigaspora sp. among others, are some of the species identified. Regarding the assessment of mycorrhizal infection in the roots, we observed that all the varieties analyzed showed colonization by hyphae. However, not all samples assessed presented colonization and the formation of arbuscules and/or vesicles was not observed.

A glass bead protocol for recovery of host cell free Ehrlichia canis and quantification by Sybr-green real-time PCR

E. canis infection of the canine cell line DH82 is a routine in studies with this bacteria. A protocol for isolation of host cell free bacteria was developed based on the use of glass beads. Improvement of infection with E. canis isolated by this method was detected by real-time PCR.

Conservação e enraizamento in vitro de infalível (Mandevilla velutina K. Schum.), uma planta medicinal do Cerrado / In vitro conservation and rooting of "infalível" (Mandevilla velutina K. Schum.), a medicinal plant of Cerrado

Mandevilla velutina (Apocynaceae) é uma planta medicinal endêmica do Cerrado brasileiro conhecida popularmente como infalível, utilizada pela população em tratamentos de processos inflamatórios e acidentes com serpentes. Atualmente, esta espécie encontra-se em risco de extinção, devido à coleta extrativista. Os objetivos deste trabalho foram otimizar o protocolo para o enraizamento in vitro de M. velutina e introduzir diferentes genótipos em banco de germoplasma in vitro, a fim de se estabelecer a conservação da espécie. Foram realizados cinco experimentos de enraizamento in vitro utilizando ANA, AIB, di e poliaminas, dithiothreitol e floroglucinol. As avaliações foram realizadas aos 30 e 60 dias quanto à porcentagem de enraizamento, número e comprimento de raiz. Para a introdução dos genótipos in vitro, foram utilizados segmentos nodais (1 cm) como explantes, contendo uma gema axilar ou apical, coletados de plantas mantidas em casa de vegetação, submetidos previamente à assepsia. As avaliações foram realizadas durante quatro semanas, quanto à porcentagem de contaminação dos explantes. Os resultados obtidos nas avaliações evidenciaram que a presença de compostos fenólicos no meio de cultura foi importante na promoção do enraizamento adventício in vitro de M. velutina e a metodologia de assepsia para a introdução de diferentes genótipos in vitro foi eficiente.

Mandevilla velutina (Apocynaceae) is a medicinal plant endemic to the Brazilian Cerrado, commonly known as "infalivel" and used by the population for treatments of inflammatory processes and accidents with snakes. This species is currently endangered due to extraction. The aims of this study were to optimize the protocol for in vitro rooting of M. velutina and to introduce different genotypes in the in vitro germplasm bank to establish the species conservation. Five experiments for in vitro rooting were conducted using NAA, IBA, di and polyamines, dithiothreitol and phloroglucinol. Evaluations were performed at 30 and 60 days as to rooting percentage, and root number and length. For the introduction of genotypes in vitro, nodal segments (1 cm) were used as explants; they had an axillary or apical bud and were collected from plants kept in a greenhouse after being subjected to asepsis. Evaluations were carried out for four weeks as to the percentage of explant contamination. Results showed that the presence of phenolic compounds in the culture medium was important to promote in vitro adventitious rooting in M. velutina and that the asepsis methodology for the introduction of in vitro of different genotypes was efficient.

Atividade alelopática de extratos aquosos de plantas medicinais na germinação de Lactuca sativa L. e Bidens pilosa L. / Allelopathic activity of aqueous extracts of medicinal plants on the germination of Lactuca sativa L. and Bidens pilosa L.

O potencial alelopático de quatro diferentes extratos de plantas medicinais (Eclipta alba, Gomphrena globosa, Tabernaemontana catharinensis e Tithonia diversifolia) foi avaliado na germinação de Bidens pilosa e Lactuca sativa. Dentre os resultados obtidos no teste de germinação, notou-se um maior poder inibitório do extrato de G. globosa sobre sementes e plântulas de Bidens pilosa e Lactuca sativa independente da concentração utilizada e aumento da atividade inibitória de extratos T. catharinensis e de T. diversifolia com aumento da concentração destes. Quanto ao Índice de Velocidade de Germinação, os dados demonstraram redução do índice devido a elevada mortalidade das plântulas submetidas aos extratos de G. globosa e de T. catharinensis e a germinação tardia das sementes submetidas ao extrato de T. diversifolia. Quanto ao vigor das sementes, as menores porcentagens de sobrevivência ocorreram extratos à 2,5 por cento para B. pilosa e 10 por cento para L. sativa.

The allelopathic potential of four different extracts of medicinal plants (Eclipta alba, Gomphrena globosa, Tabernaemontana catharinensis and Tithonia diversifolia) was evaluated on the germination of Bidens pilosa and Lactuca sativa. The results obtained in the germination test indicated a greater inhibitory activity of G. globosa extract on Bidens pilosa and Lactuca sativa seeds and seedlings, regardlessof the used concentration, and an increase in the inhibitory activity of T. catharinensis and T. diversifolia extracts with an increase in their concentrations. As to Germination Speed Index, the data demonstrated a reduction due to the high mortality of seedlings subjected to G. globosa and T. catharinensis extracts and a late germination of seeds subjected to T. diversifolia extracts. As to the vigor of seeds, the smallest survival percentages occur at 2.5 percent for B. pilosa and at 10 percent for L.sativa.

Influência de diferentes meios de cultura sobre o crescimento de Pfaffia glomerata (Spreng. ) Pedersen (Amaranthaceae) para conservação in vitro / Influence of different culture media on the growth of Pfaffia glomerata (Spreng. ) Pendersen (Amaranthaceae) for conservation in vitro

Pfaffia glomerata ocorre em vários estados do Brasil e países limítrofes da região Sul às margens de rios e nas orlas das matas de galerias, é espécie hidrófita e heliófita. As raízes de espécies do gênero Pfaffia são usadas na medicina popular brasileira, especialmente como tônico, afrodisíaco e no controle do diabete. O objetivo deste trabalho foi estabelecer um banco de germoplasma in vitro de Pfaffia glomerata. O experimento em delineamento inteiramente casualizado foi conduzido com seis tratamentos: 1) MS + 2 por cento de sacarose + 4 por cento de sorbitol; 2) MS/2 + 2 por cento de sacarose + 4 por cento de sorbitol; 3) MS + 2 por cento de sacarose + 4 por cento de sorbitol + 2 mg L-1 de pantotenato de cálcio; 4) MS/2 + 2 por cento de sacarose + 4 por cento de sorbitol + 2 mg L-1de pantotenato de cálcio; 5) MS + 2 por cento de sacarose + 3 por cento de manitol + 2 mg L-1de pantotenato de cálcio; 6) MS/2 + 2 por cento de sacarose + 3 por cento de manitol + 2 mg L-1de pantotenato de cálcio. Os resultados obtidos foram submetidos à análise de variância e ao teste de separação de médias de Scott Knott. Os tratamentos um, três e quatro apresentaram, significativamente, o maior número de segmentos nodais por haste, quando comparados com os tratamentos dois, cinco e seis. O tratamento dois foi o mais indicado para a conservação in vitro da espécie por ter promovido menor crescimento das plantas (altura de 3,1±1,9 cm), alto índice de sobrevivência, 100 por cento de explantes com brotação e o maior número de brotos por explante, após seis meses de cultivo. Todas as plântulas produziram raízes e não houve formação de calos, também não ocorreu hiperhidricidade nos tratamentos avaliados. As plantas aclimatizadas apresentaram 100 por cento de sobrevivência no ambiente ex vitro. A manutenção de acessos de P. glomerata no banco de germoplasma in vitro é viável tanto do ponto de vista da conservação quanto economicamente.

Pfaffia glomerata occurs in several states of Brazil and its neighboring countries in the south region at riverbanks and gallery forests. It is a hydrophyte and heliophyte species. The roots of the genus Pfaffia are used in Brazilian folk medicine especially as tonic, aphrodisiac and to control diabetes. The aim of this work was to establish an in vitro germplasm bank for Pfaffia glomerata. The experiment was carried out in completely randomized design with six treatments: 1) DM + 2 percent sucrose + 4 percent sorbitol; 2) DM/2 + 2 percent sucrose + 4 percent sorbitol; 3) DM + 2 percent sucrose + 4 percent sorbitol + 2 mg L-1 calcium pantothenate; 4) DM/2 + 2 percent sucrose + 4 percent sorbitol + 2 mg L-1 calcium pantothenate; 5) DM + 2 percent sucrose + 3 percent mannitol + 2 mg L-1 calcium pantothenate; 6) DM/2 + 2 percent sucrose + 3 percent mannitol + 2 mg L-1 calcium pantothenate. Results were subjected to analysis of variance and Scott Knott test for mean grouping. Treatments 1, 3 and 4 had a significantly larger number of nodal segments per stem, compared to Treatments 2, 5 and 6. Treatment 2 was the most appropriate for the in vitro conservation of this species since it led to the lowest growth (3.1±1.9 cm height), high survival rate, 100 percent explants with sprouting, and the largest number of sprouts per explant after six months of culture. All seedlings produced root and showed no formation of calluses or hyperhydricidity under the evaluated treatments. Acclimatized plants showed 100 percent survival in the ex vitro environment. Maintaining P. glomerata accessions in an in vitro germplasm bank is viable both economically and for conservation.

Estudo clínico para validação da eficácia de pomada contendo barbatimão (Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville)* na cicatrização de úlceras de decúbito / Clinical study for the validation of the efficacy of ointment containing barbatimao (Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville)* on healing of decubitus ulcers

O extrato aquoso de Stryphnodendron adstringens é tradicionalmente utilizado no Brasil como cicatrizante. Estudo clínico conduzido por seis meses teve por objetivo avaliar a eficácia de um medicamento na forma de pomada, contendo 3% de fitocomplexo fenólico de barbatimão na cicatrização de úlceras de decúbito. Foram submetidos ao protocolo clínico 27 pacientes apresentando um total de 51 úlceras, classificadas de acordo com a área e grau de profundidade (I a III) da lesão. Em média a cicatrização das lesões de grau I e II ocorreu num período de 3 a 6 semanas e as de grau III entre 10 e 18 semanas. Durante a realização do estudo 100% das lesões tratadas com o medicamento cicatrizaram completamente.

Anti-inflammatory and anti-nociceptive effects of Zeyheria montana (Bignoniaceae) ethanol extract

In this work, the analgesic and anti-inflammatory activities of Zeyheria montana Mart. ethanol leaf extract were investigated at doses of 75, 150 and 300 mg/kg body weight. In the analgesic assay, against a chemical stimulus in mice, acetic acid-induced writhes were significantly inhibited by the extract at doses of 75 mg/kg (67.27 percent), 150 mg/kg (49.38 percent) and 300 mg/kg (82.87 percent). Also, a vigorous decrease in hyperalgesia was observed when measured after 2 h and 6 h of lipopolysaccharide stimulation of rats for all doses of extract tested. Z. montana extract, at doses of 75 and 300 mg/kg, caused very slight central analgesia in rats submitted to thermal stimulus, particularly noticeable at 30 min following treatment. The anti-inflammatory activity of Z. montana extract on carrageenan-induced oedema in rats was evaluated. The oedema development, measured at 180 min following carrageenan intraplantar injection, was significantly reduced by all tested doses: 75 mg/kg (33.30 percent), 150 mg/kg (45.80 percent) and 300 mg/kg (75.00 percent). The LD50 value was greater than 2000 mg/kg. These results demonstrated that the ethanol extract from Z. montana leaf possesses anti-nociceptive and anti-inflammatory activities, which could be of relevance for the pharmacological control of pain and inflammatory processes.

In vitro evaluation of the cytotoxic and trypanocidal activities of Ampelozizyphus amazonicus (Rhamnaceae)

Ampelozizyphus amazonicus Ducke is a tree commonly found in the Amazon region and an extract of its stem bark is popularly used as an antimalarial and anti-inflammatory agent and as an antidote to snake venom. Ursolic acid; five lupane type triterpenes: betulin, betulinic acid, lupenone, 3ß-hydroxylup-20(29)-ene-27,28-dioic acid, and 2a,3ß-dihydroxylup-20(29)-ene-27,28-dioic acid, and three phytosteroids: stigmasterol, sitosterol and campesterol, have been isolated from stem extracts of A. amazonicus Ducke. Their structures were characterized by spectral data including COSY and HMQC. In an in vitro biological screening of the isolated compounds, 3ß-hydroxylup-20(29)-ene-27,28-dioic acid was cytotoxic against the SKBR-3 human adenocarcinoma cell line (1 to 10 mg/mL), while 2a,3ß-dihydroxylup-20(29)-ene-27,28-dioic acid exhibited cytotoxicity against both SKBR-3 human adenocarcinoma and C-8161 human melanoma tumor cell lines (>0.1 mg/mL). In the present study, different extracts and some fractions of this plant were also investigated for trypanocidal activity due to the presence of pentacyclic triterpenes. The triterpene classes are potent against Trypanosoma cruzi. The bioassays were carried out using blood collected from Swiss albino mice by cardiac puncture during the parasitemic peak (7th day) after infection with the Y strain of T. cruzi. The results obtained showed that A. amazonicus is a potential source of bioactive compounds since its extracts and fractions isolated from it exhibited in vitro parasite lysis against trypomastigote forms of T. cruzi at concentrations >100 æg/mL. Fractions containing mainly betulin, lupenone, 3ß-hydroxylup-20(29)-ene-27,28-dioic acid, and 2a,3ß-dihydroxylup-20(29)-ene-27,28-dioic acid showed more activity than crude extracts.

Estudo comparativo da produção de metabólitos secundários em cultura de células e na planta in natura de Gomphrena globosa (Amaranthaceae)

A cultura de calos de Gomphrena globosa a partir de segmentos foliares foi estabelecida em meio contendo combinações dos fitoreguladores auxina/citocinina. Metabólitos secundários identificados através da fitoquímica da planta in natura, foram utilizados como padrões em análises por cromatografia líquida de alta eficiência e cromatografia de gás de extratos da cultura. O estudo comparativo revelou que os calos foram capazes de produzir alguns metabólitos sintetizados pela planta in natura.

The culture of calluses of Gomphrena globosa starting from segments foliate was established in half containing combinations of the phytoregulators auxina/citocinina. Identified secondary metabolites through the phytochemistry of the plant in natura were used as patterns in analyses for high performance liquid cromatography and gas cromatography of extracts of the culture. The comparative study revealed that the calluses were capable to produce some metabolite synthesized by the plant in natura.

Biosynthesis of secondary metabolites in sugarcane

Este trabalho foi realizado com os objetivos de gerar uma coleçäo de genes relacionados ao metabolismo secundário da cana de açúcar e investigar o padräo de expressäo gênica de enzimas chaves reguladoras das principais vias biossintéticas ativas nos diferentes tipos de tecidos e situações de estresse físico-químico e biológico a que estäo submetidas plantas cultivadas em casas de vegetaçäo, campo ou in vitro. A estratégia de mineraçäo dos dados da database de sequências expressas de cana de açúcar, SUCEST, usando ferramentas de bioinformática, focalizou classes de compostos como isoprenóides e fenilpropanóides que comprovadamente desempenham um papel na resposta de plantas a variações ambientais. Foram identificados e caracterizados genes que codificam enzimas chaves para a síntese de terpenóides, como a sesquiterpeno ciclase (SC); (CHS) para síntese de flavonóides; isoflavona sintase (IFS) envolvida na biossíntese de isoflavonóides que desempenham importante papel na defesa de plantas e nodulaçäo de raízes; isoflavona redutases (IFR) enzimas chaves para a síntese de fenilpropanóide fitoalexinas, bem como enzimas relacionadas à síntese de precursores de lignina, como a enzima ácido caféico-O-metiltransferase. O efeito do estresse causado por bactérias como Herbaspirillum rubri e Gluconacetobacter diazotroficans também foi avaliado tendo sido constatada a induçäo da expressäo de chalcona sintase (CHS) em plântulas infectadas com esses agentes, sugerindo a ativaçäo da via de flavonóides em resposta a este estresse biológico. Esses resultados apontam para o fato de que as vias do metabolismo de isopropanóides e de fenilpropanóides em cana de açúcar säo ativadas de acordo com o estágio de desenvolvimento, especificidade de tecidos e em resposta a situações de estresse. Essas observações deveräo ser confirmadas por meio de experimentaçäo genética e bioquímica.